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“恒远生物”产品文献:地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠肾胺酶表达的影响*

点击次数:90 发布时间:2019/4/19
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地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠肾胺酶表达的影响*

柴辉1 刘斌1 李应东1 孙少伯1 朱贝贝1 赵信科1 刘凯1

 

[摘要]   目的:观察地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)肾胺酶表达的影响,以探讨地龙降压胶囊治疗原发性高血压的作用机制。方法:取24只8周龄雄性SHR,根据收缩压随机分为模型组  (等容量蒸馏水灌胃)及地龙降压胶囊高、低剂量组  (分别以地龙降压胶囊240 mg/kg、120 mg/kg 灌胃),每组8 只。另取8 只  WKY 雄性大鼠作为正常对照组 (等容量蒸馏水灌胃)。分别于连续给药前、给药后第2 周、4 周、6 周、8 周测定尾动脉收缩压。末次给药后,采用 ELISA 法检测大鼠血浆儿茶酚胺和血清肾胺酶含量。采用免疫组织化学法检测大鼠肾

脏肾胺酶的表达。结果:地龙降压胶囊有效降低了 SHR 收缩压、血浆儿茶酚胺水平(P<0.05);升高了 SHR 肾胺酶水平(P<0.05)。结论:地龙降压胶囊能有效降低血压,其作用机制可能是通过调节肾胺酶表达水平,从而影响血浆儿茶酚胺水平实现的。

[关键词] 地龙降压胶囊;自发性高血压大鼠;交感神经;肾胺酶;儿茶酚胺

doi:10.13201/j.issn.1001-1439.2018.01.015

[中图分类号]  R544.1 [文献标志码]  A

 

EffectofDilongantihypertensivecapsuleonexpression ofrenalaseinspontaneouslyhypertensiverats

CHAIHui  LIUBin  LIYingdong  SUNShaobo ZHUBeibei  ZHAOXinke  LIU Kai

(GansuUniversityofChinese Medicine,Lanzhou,730000,China)

Correspondingauthor:LIYingdong,E-mail:lydj412@163.com

Abstract Objective:ToobservetheeffectofDilongAntihypertensiveCapsuleontheexpressionofrenalasein spontaneouslyhypertensiverats(SHR),andexploretheunderlingmechanisms.Method:The24maleSHRsof8 weeksold wererandomlydividedinto modelgroup (gavageofdistilled waterofthesamevolume),highdose group,lowdosegroup(240 mg/kg,120 mg/kg),8ratsineachgroup.Another8 WKY maleratsweretakenas normalcontrolgroup (gavageofdistilled waterofthesamevolume).Thecarotidsystolicbloodpressure was measuredat2weeks,4weeks,6weeksand8weeksafterthecontinuousadministration.Afterthelastadminis- tration,thelevelsofplasmacatecholaminesandserumrenalaseweremeasuredbyELISA.Expressionofrenalase inKidney wasdetectedby Tissue Chemistry.Result:Dilong Antihypertensive Capsuleeffectivelyreducedthe

SHRsystolicbloodpressure,plasmacatecholaminelevels(P<0.05);increasedthelevelofSHRrenalase (P< 0.05).Conclusion:DilongAntihypertensiveCapsulescaneffectivelyreducebloodpressureanditsmechanismsmay

bethroughregulatingtheexpressionlevelrenalase,andthenaffectingplasmacatecholaminelevels.

Keywords Dilongantihypertensivecapsule;spontaneouslyhypertensiverats;sympathetic;renalase;cate- cholamines

 

 

高血压是以动脉血压进行性升高为表现的心血管疾病,是心血管疾病最重要的危险因素,致残率、致死率高。有研究认为原发性高血压是以交感神经过度兴奋为起点,引起儿茶酚胺分泌增加,血管收缩,进 而发生高血压并持续进展[1]。Milani等[2]研究发现肾胺酶可以降解儿茶酚胺,进而调节

 

* 基金项目:甘肃省自然科学基金(No:1610RJZA068);甘肃中医药大学研究生创新基金(No:CX2016-08)

1 甘肃中医药大学(兰州,730000)

通信作者:李应东,E-mail:lydj412@163.com

血压。地龙降压胶囊是甘肃中医药大学附属医院的院内制剂,在临床使用中对高血压有较好的治疗 效果,但是在对其作用机制的实验研究较少,尚未 发现有涉及其对交感神经系统的作用。本研究通过观察地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)血浆儿茶酚胺浓度以及血清肾胺酶水平变化的影响,探讨地龙降压胶囊的降压作用与影响肾胺酶表 达水平的关系,为其治疗高血压提供理论基础和实 验依据。

 

CHAIHui,etal.EffectofDilongantihypertensivecapsuleonexpressionofrenalaseinSHRs

·67·

 

 

 

 

1  材料与方法

1.1  实验动物

24只SHR 和8只 WKYSPF 级大鼠,8 周龄,雄性,购自北京维通利华实验动物技术有限公司, 许可证编号:SCXK (京)2012-0001。

1.2  实验药物与试剂

受试药物:地 龙降压胶囊(甘 肃中医药大学附属医院,批号:151026);试剂:水合氯醛(天津市光复精细化工研究所,批 号:20150105);4%多聚 甲 醛 (北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司,批 号: 20160429);RatCA ELISA Kit96T(上海恒远生物科技有限公司,批 号:201605);RbaRenalase

(北 京 博 奥 森 生 物 技 术 有 限 公 司,批 号:AC 06031757)。

1.3  实验仪器

智能无创血压计-鼠仪 BP-98A(北京软隆生物技术有限公司);JM-A5002 型电子天平(诸暨市超泽衡器设备有限公司);高 速低温离心机 (德 国Heraeus公司);微型混合器(金坛市恒丰仪器厂); Infinite200PRO 序列多功能酶标仪(Tecan 奥地利有限责任公司);ZWYR-240 恒温培养振荡器(上海智城分析仪器制造有限公司);EG1600 型包埋仪(德 国 Leica 公司);RM 2135 型切片机 (德 国 Leica公司);OLYMPUSBX5 显微镜(日本 Olym- pus 珠式会社)。

1.4  动物分组及给药

取8周龄雄性SHR24只和8周龄雄性  WKY大鼠8只,适应性喂养1 周后,用智能无创血压计- 鼠仪BP-98A 测量 SHR 收缩压,根据收缩压值查随机数字表,随机分为3 组:模型组、地龙降压胶囊低剂量组、地龙降压胶囊高剂量组,每组8 只。地龙降压胶囊干预组,分别以每日地龙降压胶囊低剂

化检测。

1.5.3  指标检测 血浆儿茶酚胺(CA)、血清肾胺酶(renalase)水平测定采用酶联免疫吸附法检测,严格按照试剂盒说明进行操作。

1.6  统计学处理

采用SPSS20.0 软件进行统计学处理。数据结果符合正态分布以x珚±s 表示,定量资料多组间两两比较采用方差分析 (方差齐的采用 LSD 检验,

方差不齐者采用 Dunnett't检验),以 P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1  地龙降压胶囊对SHR 收缩压的影响

与  WKY 组比较,模型组大鼠收缩压随鼠龄增

加逐渐升高(P<0.05);与模型组相比,随着给药时间的延长,地龙降压胶囊高剂量组给药第4 周收缩

压下降有统计学差异(P<0.05),地龙降压胶囊低剂量组给药第6 周收缩压下降有统计学差异  (P< 0.05);地龙降压胶囊高、低剂量组之间的差异无统

计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2  地龙降压胶囊对SHR 血浆儿茶酚胺水平、血

清肾胺酶水平的影响

与  WKY 组比较,模型组大鼠血浆儿茶酚胺水

平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地龙降压胶囊高、低剂量组大鼠血浆儿茶酚胺

水平均降低(P<0.05)。给药8 周后,与  WKY 组比较,模型组大鼠血清肾胺酶水平降低,差异有统

计学意义(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠血清中肾胺酶水平均升高,差异有统计学意义  (P

<0.05);其中以高剂量组差异显著。见表2。

 

表2 地龙降压胶囊对SHR 儿茶酚胺和肾胺酶水平的影响

Table2 TheinfluenceofDilongantihypertensivecapsuleon

 

量组120 mg/kg(临床成人用量的等效剂量)、地龙降压胶囊高剂量组240 mg/kg(临床成人用量等效剂量的2倍)灌胃。模型组给予等体积的蒸馏水灌

catecholamineandrenalaseinSHR

儿茶酚胺

分组

/(μg·L-1)

x珚±s

肾胺酶

/(μg·ml-1)

 

胃。另取 WKY 雄 性 大 鼠 8 只 作 为 正 常 对 照

(WKY 组),给予等体积的蒸馏水灌胃。所有大鼠每日灌胃1次,药物干预8周。

1.5  检测指标

1.5.1  一般情况及收缩压监测     分别于连续给药前、给药后第2周、4 周、6 周、8 周测定大鼠动脉血压。动脉血压用智能无创血压计-鼠仪 BP-98A,采用尾套法,给每只大鼠连续测量血压5 次,取平均值作为测量结果。

1.5.2  样品采集及处理      干预 8 周实验结束后,夜 间禁食,次 日清晨腹腔注射 10% 水合氯醛(3 ml/kg)麻 醉,心 脏采血 4 ml后 分离血清用于血清学检测;脱 颈椎处死后剖腹摘取完整左侧肾脏用4% 多聚甲醛固定48h 后行免疫组

WKY 组 70.97±14.46   4.39±0.34

模型组 124.84±17.511)   1.76±0.291)地龙降压胶囊高剂量组     90.09±12.442)   4.37±0.252)地龙降压胶囊低剂量组     92.58±11.842)   2.93±0.591)2)

与  WKY 组比较,1)P <0.05;与 模型组比较,2)P <

0.05。

 

2.3  肾脏肾胺酶的表达

免疫组化显示,WKY 组大鼠肾胺酶在近端小管中高度表达,也存在于肾小球和远端小管中(棕黄色颗粒,以下同地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠肾胺酶表达的影响*

 

柴辉1 刘斌1 李应东1 孙少伯1 朱贝贝1 赵信科1 刘凯1

 

[摘要]   目的:观察地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)肾胺酶表达的影响,以探讨地龙降压胶囊治疗原发性高血压的作用机制。方法:取24只8周龄雄性SHR,根据收缩压随机分为模型组  (等容量蒸馏水灌胃)及地龙降压胶囊高、低剂量组  (分别以地龙降压胶囊240 mg/kg、120 mg/kg 灌胃),每组8 只。另取8 只  WKY 雄性大鼠作为正常对照组 (等容量蒸馏水灌胃)。分别于连续给药前、给药后第2 周、4 周、6 周、8 周测定尾动脉收缩压。末次给药后,采用 ELISA 法检测大鼠血浆儿茶酚胺和血清肾胺酶含量。采用免疫组织化学法检测大鼠肾

脏肾胺酶的表达。结果:地龙降压胶囊有效降低了 SHR 收缩压、血浆儿茶酚胺水平(P<0.05);升高了 SHR 肾胺酶水平(P<0.05)。结论:地龙降压胶囊能有效降低血压,其作用机制可能是通过调节肾胺酶表达水平,从而影响血浆儿茶酚胺水平实现的。

[关键词] 地龙降压胶囊;自发性高血压大鼠;交感神经;肾胺酶;儿茶酚胺

doi:10.13201/j.issn.1001-1439.2018.01.015

[中图分类号]  R544.1 [文献标志码]  A

 

EffectofDilongantihypertensivecapsuleonexpression ofrenalaseinspontaneouslyhypertensiverats

CHAIHui  LIUBin  LIYingdong  SUNShaobo ZHUBeibei  ZHAOXinke  LIU Kai

(GansuUniversityofChinese Medicine,Lanzhou,730000,China)

Correspondingauthor:LIYingdong,E-mail:lydj412@163.com

Abstract Objective:ToobservetheeffectofDilongAntihypertensiveCapsuleontheexpressionofrenalasein spontaneouslyhypertensiverats(SHR),andexploretheunderlingmechanisms.Method:The24maleSHRsof8 weeksold wererandomlydividedinto modelgroup (gavageofdistilled waterofthesamevolume),highdose group,lowdosegroup(240 mg/kg,120 mg/kg),8ratsineachgroup.Another8 WKY maleratsweretakenas normalcontrolgroup (gavageofdistilled waterofthesamevolume).Thecarotidsystolicbloodpressure was measuredat2weeks,4weeks,6weeksand8weeksafterthecontinuousadministration.Afterthelastadminis- tration,thelevelsofplasmacatecholaminesandserumrenalaseweremeasuredbyELISA.Expressionofrenalase inKidney wasdetectedby Tissue Chemistry.Result:Dilong Antihypertensive Capsuleeffectivelyreducedthe

SHRsystolicbloodpressure,plasmacatecholaminelevels(P<0.05);increasedthelevelofSHRrenalase (P< 0.05).Conclusion:DilongAntihypertensiveCapsulescaneffectivelyreducebloodpressureanditsmechanismsmay

bethroughregulatingtheexpressionlevelrenalase,andthenaffectingplasmacatecholaminelevels.

Keywords Dilongantihypertensivecapsule;spontaneouslyhypertensiverats;sympathetic;renalase;cate- cholamines

 

 

高血压是以动脉血压进行性升高为表现的心血管疾病,是心血管疾病最重要的危险因素,致残率、致死率高。有研究认为原发性高血压是以交感神经过度兴奋为起点,引起儿茶酚胺分泌增加,血管收缩,进 而发生高血压并持续进展[1]。Milani等[2]研究发现肾胺酶可以降解儿茶酚胺,进而调节

 

* 基金项目:甘肃省自然科学基金(No:1610RJZA068);甘肃中医药大学研究生创新基金(No:CX2016-08)

1 甘肃中医药大学(兰州,730000)

通信作者:李应东,E-mail:lydj412@163.com

血压。地龙降压胶囊是甘肃中医药大学附属医院的院内制剂,在临床使用中对高血压有较好的治疗 效果,但是在对其作用机制的实验研究较少,尚未 发现有涉及其对交感神经系统的作用。本研究通过观察地龙降压胶囊对自发性高血压大鼠(SHR)血浆儿茶酚胺浓度以及血清肾胺酶水平变化的影响,探讨地龙降压胶囊的降压作用与影响肾胺酶表 达水平的关系,为其治疗高血压提供理论基础和实 验依据。

 

CHAIHui,etal.EffectofDilongantihypertensivecapsuleonexpressionofrenalaseinSHRs

·67·

 

 

 

 

1  材料与方法

1.1  实验动物

24只SHR 和8只 WKYSPF 级大鼠,8 周龄,雄性,购自北京维通利华实验动物技术有限公司, 许可证编号:SCXK (京)2012-0001。

1.2  实验药物与试剂

受试药物:地 龙降压胶囊(甘 肃中医药大学附属医院,批号:151026);试剂:水合氯醛(天津市光复精细化工研究所,批 号:20150105);4%多聚 甲 醛 (北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司,批 号: 20160429);RatCA ELISA Kit96T(上海恒远生物科技有限公司,批 号:201605);RbaRenalase

(北 京 博 奥 森 生 物 技 术 有 限 公 司,批 号:AC 06031757)。

1.3  实验仪器

智能无创血压计-鼠仪 BP-98A(北京软隆生物技术有限公司);JM-A5002 型电子天平(诸暨市超泽衡器设备有限公司);高 速低温离心机 (德 国Heraeus公司);微型混合器(金坛市恒丰仪器厂); Infinite200PRO 序列多功能酶标仪(Tecan 奥地利有限责任公司);ZWYR-240 恒温培养振荡器(上海智城分析仪器制造有限公司);EG1600 型包埋仪(德 国 Leica 公司);RM 2135 型切片机 (德 国 Leica公司);OLYMPUSBX5 显微镜(日本 Olym- pus 珠式会社)。

1.4  动物分组及给药

取8周龄雄性SHR24只和8周龄雄性  WKY大鼠8只,适应性喂养1 周后,用智能无创血压计- 鼠仪BP-98A 测量 SHR 收缩压,根据收缩压值查随机数字表,随机分为3 组:模型组、地龙降压胶囊低剂量组、地龙降压胶囊高剂量组,每组8 只。地龙降压胶囊干预组,分别以每日地龙降压胶囊低剂

化检测。

1.5.3  指标检测 血浆儿茶酚胺(CA)、血清肾胺酶(renalase)水平测定采用酶联免疫吸附法检测,严格按照试剂盒说明进行操作。

1.6  统计学处理

采用SPSS20.0 软件进行统计学处理。数据结果符合正态分布以x珚±s 表示,定量资料多组间两两比较采用方差分析 (方差齐的采用 LSD 检验,

方差不齐者采用 Dunnett't检验),以 P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1  地龙降压胶囊对SHR 收缩压的影响

与  WKY 组比较,模型组大鼠收缩压随鼠龄增

加逐渐升高(P<0.05);与模型组相比,随着给药时间的延长,地龙降压胶囊高剂量组给药第4 周收缩

压下降有统计学差异(P<0.05),地龙降压胶囊低剂量组给药第6 周收缩压下降有统计学差异  (P< 0.05);地龙降压胶囊高、低剂量组之间的差异无统

计学意义(P>0.05)。见表1。

2.2  地龙降压胶囊对SHR 血浆儿茶酚胺水平、血

清肾胺酶水平的影响

与  WKY 组比较,模型组大鼠血浆儿茶酚胺水

平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,地龙降压胶囊高、低剂量组大鼠血浆儿茶酚胺

水平均降低(P<0.05)。给药8 周后,与  WKY 组比较,模型组大鼠血清肾胺酶水平降低,差异有统

计学意义(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠血清中肾胺酶水平均升高,差异有统计学意义  (P

<0.05);其中以高剂量组差异显著。见表2。

 

表2 地龙降压胶囊对SHR 儿茶酚胺和肾胺酶水平的影响

Table2 TheinfluenceofDilongantihypertensivecapsuleon

 

量组120 mg/kg(临床成人用量的等效剂量)、地龙降压胶囊高剂量组240 mg/kg(临床成人用量等效剂量的2倍)灌胃。模型组给予等体积的蒸馏水灌

catecholamineandrenalaseinSHR

儿茶酚胺

分组

/(μg·L-1)

x珚±s

肾胺酶

/(μg·ml-1)

 

胃。另取 WKY 雄 性 大 鼠 8 只 作 为 正 常 对 照

(WKY 组),给予等体积的蒸馏水灌胃。所有大鼠每日灌胃1次,药物干预8周。

1.5  检测指标

1.5.1  一般情况及收缩压监测     分别于连续给药前、给药后第2周、4 周、6 周、8 周测定大鼠动脉血压。动脉血压用智能无创血压计-鼠仪 BP-98A,采用尾套法,给每只大鼠连续测量血压5 次,取平均值作为测量结果。

1.5.2  样品采集及处理      干预 8 周实验结束后,夜 间禁食,次 日清晨腹腔注射 10% 水合氯醛(3 ml/kg)麻 醉,心 脏采血 4 ml后 分离血清用于血清学检测;脱 颈椎处死后剖腹摘取完整左侧肾脏用4% 多聚甲醛固定48h 后行免疫组

WKY 组 70.97±14.46   4.39±0.34

模型组 124.84±17.511)   1.76±0.291)地龙降压胶囊高剂量组     90.09±12.442)   4.37±0.252)地龙降压胶囊低剂量组     92.58±11.842)   2.93±0.591)2)

与  WKY 组比较,1)P <0.05;与 模型组比较,2)P <

0.05。

 

2.3  肾脏肾胺酶的表达

免疫组化显示,WKY 组大鼠肾胺酶在近端小管中高度表达,也存在于肾小球和远端小管中(棕黄色颗粒,以下同)。模型组大鼠肾胺酶在近端小管、远端小管、肾小球表达较 WKY 组明显减少;地龙降压胶囊各剂量组与模型组比较,肾胺酶表达均有不同程度增加。见图1。

 

)。模型组大鼠肾胺酶在近端小管、远端小管、肾小球表达较 WKY 组明显减少;地龙降压胶囊各剂量组与模型组比较,肾胺酶表达均有不同程度增加。见图1。

 

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